柱式质粒大量抽提试剂盒(100～200mL)

产品货号：

GS2252

中文名称：

柱式质粒大量抽提试剂盒(100～200mL)

英文名称：

SD-500 Spin Column Plasmid Max-Preps Kit(100-200mL)

产品规格：

10T|20T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒适用于质粒DNA的大量抽提纯化，方法简单高效。质粒DNA被选择性地吸附到硅胶柱上，其他杂质如蛋白、盐离子、核苷酸、寡核苷酸(<40-mer)等会被洗脱掉。试剂盒采用独特的25mL吸附柱，最多可吸附500mg质粒DNA。纯化的DNA可用于测序、酶切、标记、转化、PCR和Southern-blotting等后续分子生物学实验。

快速。整个过程只需要30～40min。
从菌液中制备出高质量的质粒DNA。纯化的DNA可用于测序、转化、限制性酶切和转染等后续分子生物学实验。
回收率高(80～90%)，重复性好。
无需苯酚/氯仿抽提；无需乙醇沉淀。

组分	10T	20T
Solution I	110mL	2×110mL
Solution II^a	110mL	2×110mL
Solution III	2×75mL	4×75mL
Wash Solution^b	24mL	48mL
Elution Buffer^c	30mL	60mL
Boiled RNase A(10mg/mL)^d	1.6mL	3.2mL
SPIN500吸附柱	10	20
50mL收集管	20	40

Solution II保存过程可能会形成沉淀。如有沉淀，则将溶液于37℃温浴使沉淀溶解。
使用前，24mL Wash Solution(10次)中应加入96mL无水乙醇，48mL Wash Solution (20次)中应加入192mL无水乙醇。如果由于运输过程泄漏导致Wash Solution体积不足24mL或48mL，则需要重新测量其体积，并确定应该加入多少ml的乙醇(无水乙醇:Wash Solution = 4:1)。
Elution Buffer为2.0mM Tris-HCl，pH8.5。
使用前，将Boiled RNase A加入到Solution I中。含RNase A的Solution I如经常使用应保存于4℃，不经常使用则保存于-20℃。

细菌被裂解后，裂解产物用常规方法去除(Solution I，II，III)。去除裂解产物后，质粒DNA被选择性地吸附到吸附柱内的硅胶膜上，杂质被洗涤掉。纯的DNA用低盐缓冲液或水洗脱出来。

使用方法

质粒DNA纯化步骤：

加入100～200mL过夜培养的细菌(OD₆₀₀=2.5～5)到合适大小的离心管中，5000rpm离心10min。吸净上清液。
注意：不要加入过多菌体，否则裂解不完全。
向菌体沉淀加入10mL Solution I，温和混匀，冰上静置2min。
注意：请沉底悬浮菌体，否则会裂解不完全。
向上述混合液中加入10mL Solution II，温和颠倒离心管4～6次，室温静置2min。
注意：为避免基因组DNA污染，请勿剧烈涡旋振荡。裂解时间不可超过5min。
加入14mL Solution III，温和混匀。室温静置2min
12000rpm离心15min。
(选做)将上清液转移到50mL离心管中，重复步骤5一次。
将吸附柱放入50mL离心管中。将上清液转移到吸附柱中，室温静置5min。10000rpm离心3～5min。
倒掉收集管中的液体。加入5mL Wash Solution到吸附柱中，8000rpm离心3～5min。
重复洗脱步骤8一次。
倒掉收集管中的液体。10000rpm离心5min以除去残余的Wash Solution。
注意：为能够更好地洗脱质粒DNA，请将SPIN500吸附柱室温静置10 minu或50℃烘箱烘干5min，以使残留的乙醇彻底挥发。
将吸附柱放入一个干净的50mL离心管中。在吸附膜中央加入1mL Elution Buffer，并在37～50℃温浴2min。10000rpm离心2min。DNA保存于冰箱–20℃。
注意：为能够更好地洗脱质粒DNA，可将Elution Buffer或ddH2O加热至60℃，再加入到SPIN500吸附柱中。在吸附膜中央加入Elution Buffer非常重要。将Elution Buffer于55～80℃预热可提高洗脱效率。推荐洗脱两次。

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